在样品纯化计算得率或对电泳、WB数据进行归一化处理等过程中,经常需要对蛋白进行快速、准确的定量。蛋白定量方法很多,默克密理博提供两个经典的试剂盒,BCA法较为通用,而精确定量法推荐用于对数据要求较高的情况。另外默克密理博即将上市的Direct Detect红外定量仪将进一步简化和方便日常的定量操作。 BCA蛋白检测试剂盒 基于双缩脲反应的简单可靠的检测方法。蛋白质分子中的肽键在碱性条件下,与Cu2+产生紫红色络合反应,使Cu2+还原为Cu+,BCA是一种生色试剂,可以螯合Cu+,产生紫色复合物,在562nm处有很强的吸收值,且吸收值与蛋白浓度在很大范围内成正比。 Non-Interfering Protein Assay精确定量试剂盒 采用通用蛋白沉淀试剂(UPPA™)将蛋白沉淀和固定于离心管中,以除去蛋白溶液中可能含有的去污剂、螯合剂、还原剂、胺、糖、尿素等的干扰。蛋白浓度测定基于肽链骨架与铜的特异性结合。随蛋白浓度增加,未结合的铜离子浓度降低,光密度与溶液中蛋白浓度负相关。
二、主要特点
默克密理博Novagen的BCA蛋白检测试剂盒可用于定量浓度在20-2000μg/ml的蛋白样品,可在数分钟内得到检测结果,即使在某些化合物及去污剂存在的情况下也可以获得准确的检测结果,但螯合剂、强酸、强碱、还原剂有可能会干扰实验结果。试剂盒中提供500ml的BCA溶液,15ml的硫酸铜溶液及3×1ml的牛血清白蛋白标准品(2mg/ml)。每个试剂盒足够用于500次标准反应或者2500次微量反应的蛋白浓度测定。 该试剂盒在与以下Novagen蛋白抽提和裂解试剂相兼容:BugBuster®蛋白抽提试剂、PopCulture®试剂、CytoBuster™蛋白抽提试剂、Reportasol™抽提试剂和昆虫PopCulture试剂。 Non-Interfering Protein Assay精确定量试剂盒包括:UPPA试剂ⅠⅡ,铜溶液Ⅰ,显色试剂A和B,以及BSA标准蛋白。每个试剂盒足够用于500次蛋白浓度测定。
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