His•Tag序列(6，8或10连续的组氨酸残基)是原核表达系统和部分真核表达系统中最常用的融合标签，研究者可采用固定化金属亲和色谱(IMAC)一步法快速纯化带有His•Tag序列的融合蛋白。默克密理博的Novagen品牌提供全套的His•Tag纯化产品，目的蛋白与固定化在NTA或IDA基质树脂上的二价阳离子(Ni²⁺)结合。当未结合的蛋白被淋洗掉后，目的蛋白即可采用咪唑或pH较低的缓冲液洗脱下来。Novagen的这套通用的纯化系统可以被用来在温和非变性的条件下，或6M胍盐或尿素的变性条件下纯化蛋白。

二、主要特点

His纯化树脂上最常用的螯合物包括氮川乙酸（NTA）和亚氨二乙酸（IDA），它们分别具有四个和三个与金属离子相互作用的位点。在天然和变性条件下，这两种化学基团的亲和介质及其目标蛋白的结合、洗涤和洗脱条件的特性不尽相同。实际应用中，NTA因多一个螯合位点，使纯化过程中金属浸出最小，并与还原二硫键的20mM β-巯基乙醇相容。缓冲液中存在其它螯合或还原成分时，由于IDA树脂的高金属浸出率纯化结果通常不够好。然而，IDA介质可以循环使用几百次而性能基本保持不变。

Novagen提供的各种His•Bind基质可以满足几乎所有融合蛋白纯化要求。具体包括：小规模纤维素基质的柱或筒，可以同时纯化多种样品；大包装易用型琼脂糖基质，进行批量纯化的重力流柱；以及达到生产级高速纯化要求的Superflow™和Fractogel树脂。还有与BugBuster、PopCulture等温和抽提试剂组合成方便的试剂盒，避免超声波操作，使可溶活性蛋白得率显著提高。另提供方便的预制His缓冲液试剂盒及His·Tag检测单克隆抗体。

最新推出的PureProteome His·Tag融合蛋白Ni纯化磁珠推荐用于快速、高通量纯化小量样品，也适合自动纯化工作站使用。

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